京都大學本科生研究團隊 iGEM Kyoto 的成員 Alexander Y. Liu、Hiroto Koga 和 Chihiro Aiya 開發了一種用於 DNA 克隆的新反應混合物。 僅通過混合兩種酶,成本是昂貴試劑的千分之一。性能與商業產品相似。
DNA克隆是分子生物學的核心技術,需要用“剪刀”和“膠水”切割DNA的複雜過程。最近,使用了一種基於“同源重組”的簡單方法,但對昂貴試劑的需求給許多實驗室的預算帶來了壓力。
由於預算有限,研究團隊對購買昂貴的試劑猶豫不決,並開始思考“我們可以自己創造一種新的反應溶液嗎?”著眼於報導“同源重組”可以通過使用“SLiCE”來實現,“SLiCE”是一種使用特殊方法從大腸桿菌中提取的溶液,而無需使用昂貴的試劑。
研究表明,核酸外切酶 III (ExoIII) 和核酸外切酶 T (ExoT) 兩種酶負責該活性。 通過簡單地混合兩種酶,我們成功地完全再現了 SLiCE 的活性,其中溶解了無數蛋白質。負責主要活動的 ExoIII 是市售的,但由於它被稀釋和使用,如果您購買 2 日元的試劑,則可以進行 2 次重組反應(市售試劑盒每次反應約 80 日元。) .以極低的成本製作可與昂貴的試劑盒相媲美的雞尾酒(混合物)已經成為可能。
製備的雞尾酒可以在非常穩定的條件下儲存,即使長期儲存後活性也不會降低。這一成就有望顯著降低全球 DNA 克隆的成本。